सेंगर अनुक्रमण और पाइरो सिक्वेंसिंग के बीच का अंतर | सेंगर सीक्वेंसिंग बनाम पियरोसेक्सेनिंग

महत्वपूर्ण अंतर - सिनार अनुक्रमण बनाम पीयरोसेक्सेनिंग

ज्ञान से डीएनए विश्लेषण के लिए डीएनए विश्लेषण के लिए बहुत महत्वपूर्ण है एक विशेष डीएनए क्षेत्र पर सही न्यूक्लियोटाइड व्यवस्था से इसके बारे में कई महत्वपूर्ण जानकारी सामने आती हैं। अलग डीएनए अनुक्रमण तरीकों हैं। सेंगर अनुक्रमण और पाइरो सिक्वेंसेसिंग, आणविक जीवविज्ञान में व्यापक रूप से इस्तेमाल किए जाने वाले दो अलग डीएनए अनुक्रमण तरीकों हैं। सेंगर अनुक्रमण और पाइरो सक्सेन्सिंग के बीच मुख्य अंतर यह है कि सेंगर अनुक्रमण, न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम को पढ़ने के लिए डीएनए के संश्लेषण को समाप्त करने के लिए डीडोऑक्सीन्यूक्लियोटाइड्स का उपयोग करता है, जबकि पाइरोसेक्विंगिंग न्यूक्लियोटाइड्स को शामिल करके और पूरक अनुक्रम को संश्लेषित करने के लिए शुद्ध क्रम को पढ़ने के लिए पाइरोफॉस्फेट रिलीज का पता लगाता है अनुक्रम।

सामग्री

1। अवलोकन और महत्वपूर्ण अंतर

2 सेंन्जर सीक्वेंसिंग 3 क्या है पीरोसेक्सेन्सिंग 4 क्या है साइड तुलना द्वारा साइड - सगर सिक्वेंसिंग बनाम पियरोसेक्सेन्सिंग

5 सारांश

सेंगर सीक्वेंसिंग क्या है?

सेंगर अनुक्रमण, फ्रेडरिक सेंगर और उनके कॉलेजों द्वारा 1 9 77 में विकसित की गई पहली पीढ़ी के डीएनए अनुक्रमण पद्धति है। इसे

चेन टर्मिनेशन अनुक्रमण [99 9] या

डीडीओसी अनुक्रमण [99 9] के रूप में भी जाना जाता है क्योंकि यह डायडोऑक्सिनक्लियोटाइड्स (डीडीएनटीपी) द्वारा चेन समाप्ति इस पद्धति का व्यापक रूप से 30 वर्षों तक इस्तेमाल किया गया था जब तक कि नई पीढ़ी सिक्वेंसिंग (एनजीएस) विकसित नहीं हुई। सेंगर अनुक्रमण तकनीक ने सही न्यूक्लियोटाइड ऑर्डर या एक विशेष डीएनए टुकड़ा के लगाव की खोज को सक्षम किया। यह डीडीएनटीपी के चयनात्मक निगमन पर आधारित है और इन विट्रो डीएनए प्रतिकृति के दौरान डीएनए संश्लेषण की समाप्ति पर आधारित है। 3 'ओएच समूहों की अनुपस्थिति ने आसन्न न्यूक्लियोटाइड्स के बीच फॉस्फोडाइस्टर बंधन निर्माण को जारी रखने के लिए डीडीएनटीपी की एक अनूठी विशेषता है। इसलिए, एक बार डीडीएनटीपी जुड़ा हुआ है, उस समय से चेन बढ़ाव समाप्त होता है और समाप्त होता है। चार डीडीएनटीपी - डीडीएटीपी, डीडीसीटीपी, डीडीटीपीटी और डीडीटीटीपी - सेंजर अनुक्रमण में इस्तेमाल किया गया है। ये न्यूक्लियोटाइड डीएनए प्रतिकृति प्रक्रिया को रोकते हैं, जब उन्हें डीएनए की बढ़ती भूग्रस्त में शामिल किया जाता है और परिणामस्वरूप छोटे डीएनए की लंबाई अलग हो जाती है। केशिलरी जेल वैद्युतकणसंचलन का इस्तेमाल इन छोटे डीएनए किलों को अपने आकारों से जेल पर व्यवस्थित करने के लिए किया जाता है जैसा कि चित्रा 01 में दिखाया गया है।

चित्रा 1: संश्लेषित लघु डीएनए के केशिका जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए इन विट्रो

डीएनए की प्रतिकृति, कुछ आवश्यकताएँ प्रदान की जानी चाहिए। वे डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम, टेम्पलेट डीएनए, ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड प्राइमर्स, और डीओक्सिनक्लियोक्लाइडाइड्स (डीएनटीपी) हैं। सेंगर अनुक्रमण में, डीएनए प्रतिकृति चार अलग-अलग टेस्ट ट्यूबों में चार प्रकार के डीडीएनटीपी के साथ अलग से किया जाता है। Deoxynucleotides पूरी तरह से संबंधित डीडीएनटीपी द्वारा प्रतिस्थापित नहीं हैं विशेष डीएनटीपी का मिश्रण (उदाहरण के लिए; डीएटीपी + डीडीएटीपी) ट्यूब में शामिल है और दोहराया गया है। चार अलग-अलग ट्यूब उत्पादों को चार अलग-अलग कुओं में जेल पर चलाया जाता है। फिर जेल को पढ़ने से, दृश्य चित्रा 02 में दिखाए गए अनुसार बना सकते हैं।

चित्रा 02: सेंजर अनुक्रमण सेंगर अनुक्रमण एक महत्वपूर्ण तकनीक है जो आणविक जीव विज्ञान के कई क्षेत्रों में मदद करता है। मानव जीनोम प्रोजेक्ट सफलतापूर्वक सेंगर अनुक्रमण-आधारित तरीकों की सहायता से पूरा किया गया। सेंन्जर अनुक्रमण, लक्ष्य डीएनए अनुक्रमण, कैंसर और आनुवंशिक बीमारी अनुसंधान, जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण, मानव पहचान, रोगज़नक पहचान, माइक्रोबियल अनुक्रमण आदि में भी उपयोगी है। सेंगर अनुक्रमण के कई नुकसान हैं: डीएनए की लंबाई अनुक्रमित 1000 आधार जोड़े से अधिक नहीं हो सकता एक समय में केवल एक किनारा अनुक्रमित किया जा सकता है।

प्रक्रिया समय-उपभोक्ता और महंगी है

इसलिए, इन समस्याओं को दूर करने के लिए समय के साथ नई उन्नत अनुक्रमण तकनीकों का विकास किया गया। हालांकि, सेंगर अनुक्रमण अभी भी लगभग 850 बेस जोड़ी लंबाई के टुकड़े तक अपने सटीक परिणामों के कारण उपयोग में है।

पाइरोसेनिंगिंग क्या है?

पुरोसेक्विंगिंग "संश्लेषण द्वारा अनुक्रमण" पर आधारित एक उपन्यास डीएनए अनुक्रमण तकनीक है। यह तकनीक न्यूक्लियोटाइड निगमन पर पाइरोफोस्फेट रिलीज की पहचान पर निर्भर करता है। यह प्रक्रिया चार अलग-अलग एंजाइमों द्वारा नियोजित होती है: डीएनए पॉलिमर्स, एटीपी सल्फ़रीलाज़, ल्यूइफेरेज़ और एपिरस और दो सबस्ट्रेट्स एडेनोसिन 5 'फॉस्फोसल्फेट (एपीएस) और ल्यूएफेरिन।

• प्रक्रिया एकल-फंसे डीएनए टेम्पलेट के साथ बाइंडिंग के साथ शुरू होती है और डीएनए पोलीमरेज़ इसके पूरक के लिए न्यूक्लियोटाइड्स के निगमन को शुरू करती है। जब न्यूक्लियोटाइड्स एक साथ मिलते हैं (न्यूक्लिक एसिड पॉलीमराइज़ेशन), तो यह पीय्रोफोसाफ्ट (दो फॉस्फेट समूह एक साथ बंधे) समूह और ऊर्जा को रिलीज करता है। प्रत्येक न्यूक्लियोटाइड अतिरिक्त पाइरोफॉस्फेट के समिवोलर मात्रा को जारी करता है। एस्ट्रित एपीएस की उपस्थिति में एआईटीपी सल्फ़्य्यूरस द्वारा एआईटीपी में पाइरोफोसेट को परिवर्तित किया जाता है। जेपीटी एटीपी ल्यूइफेरेज़-मध्यस्थता रूपांतरण को ऑक्सीलेयूएफ़ेरिन के लिए ल्यूइफ़ेरिन का रूपांतरण करता है, एटीपी की मात्रा के अनुपात में दृश्यमान प्रकाश उत्पन्न करता है। प्रकाश का पता लगाने के लिए फोटोन डिटेक्शन डिवाइस या फोटोमल्टिपिअर द्वारा पता चलता है और एक प्योरोग्राम बनाता है। प्रतिक्रिया मिश्रण में एपीआर और गैर-निगमित डीएनटीपी डिफरेट करता है। डीएनटीपी जोड़ एक बार में एक बार किया जाता है। चूंकि न्यूक्लियोटाइड को जोड़ने के लिए प्रकाश की पहचान और पहचान के अनुसार जाना जाता है, इसलिए टेम्पलेट का क्रम निर्धारित किया जा सकता है।चित्रा 03 में दिखाए गए अनुसार नमूना डीएनए के न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम को उत्पन्न करने के लिए पाइरोग्राम का उपयोग किया जाता है।
• डीयूएन के लघु हिस्सों के एकल न्यूक्लियोटाइड पॉलिमोरफिज़्म विश्लेषण और अनुक्रमण में पाइरोसेनिंगिंग बहुत महत्वपूर्ण है। उच्च सटीकता, लचीलापन, स्वचालन की आसानी और समानांतर प्रसंस्करण, सेंगर अनुक्रमण तकनीकों के ऊपर pyrosequencing के फायदे हैं।
• चित्रा 03: पुरोसेक्सेनिंग

सेंगर सीक्वेंसिंग और पाइरो सक्सेन्सिंग के बीच अंतर क्या है?

- तालिका से पहले अंतर आलेख ->

सगर सिक्वेंसिंग बनाम पियरोसेक्वेनिंग

सगर अनुक्रमण, डीएनएनए पोलीमरेज़ और चेन समाप्ति द्वारा डीडीएनटीपी के चयनात्मक निगमन के आधार पर एक डीएनए अनुक्रमण पद्धति है।

पाइरोसेक्नेसिंग एक डीएनए अनुक्रमण पद्धति है जो न्यूक्लियोटाइड के शामिल होने पर पायरोफोस्फेट रिलीज की पहचान के आधार पर है।

डीडीएनटीपी डीडीएनटीपी का उपयोग डीएनए प्रतिकृति को खत्म करने के लिए किया जाता है

डीडीएनटीपी इस्तेमाल नहीं किया जाता है

एंजाइमों में शामिल

डीएनए पोलीमरेज़ का उपयोग किया जाता है
चार एंजाइमों का उपयोग किया जाता है: डीएनए पोलीमरेज़, एटीपी सफ़्यूरल, लुसीफेरेज़ और एपिरस	उपयोग किए जाने वाले सब्स्ट्रेट्स
एपीएस और लूसीफेरिन का उपयोग नहीं किया जाता है।
एडेनोसिन 5 'फॉस्फोसल्फेट (एपीएस) और ल्यूइफेरिन का उपयोग किया जाता है।	अधिकतम तापमान
यह एक धीमी प्रक्रिया है
यह एक तेज प्रक्रिया है	सार - संगेर सीक्वेंसिंग बनाम पियरोसेक्सेनिंग सेंगर अनुक्रमण और पाइरो सक्वेन्सिंग दो आणविक जीव विज्ञान में इस्तेमाल होने वाले दो डीएनए अनुक्रमण तरीकों हैं। सेंगर सिकेंजिंग श्रृंखला के विस्तार को समाप्त करके अनुक्रम में न्यूक्लियोटाइड्स के आदेश का निर्माण करती है, जबकि pyrosequencing nucleotides के समावेश और पाइरोफॉस्फेट्स की रिहाई का पता लगाने के क्रम में न्यूक्लियोटाइड के सटीक आदेश का निर्माण करती है। इसलिए, सेंगर अनुक्रमण और पाइरो सक्सेन्सिंग के बीच मुख्य अंतर यह है कि चेन समापन द्वारा अनुक्रमण पर काम करने वाले संगेर अनुक्रमण, जबकि संश्लेषण द्वारा अनुक्रमण पर काम करता है pyrosequencing।
संदर्भ:
1 फकरुद्दीन, एमडी, और अभिजीत चौधरी "पाइरो सक्सेन्सिंग-पारंपरिक शेंगर्स सेक्शन के लिए एक वैकल्पिक "अमेरिकन जर्नल ऑफ बायोकैमिस्ट्री एंड बायोटेक्नोलॉजी विज्ञान प्रकाशन, 02 मार्च 2012. वेब 28 फरवरी 2017.	2 "सेंगर अनुक्रमण "सेंगर अनुक्रमण - विज्ञान निर्देशक विषय एन। पी।, एन घ। वेब। 28 फरवरी 2017
चित्र सौजन्य:
1 "डाइडेक्सी-मेथोड" क्रिस्टोफ़ गोमेन्स द्वारा (मॉडिफिज़िएर्ट) - डॉ। नॉर्मन मॉडर, औफ बेसिस इनिटर डेटी वॉन क्रिस्टोफ गोमेन्स (सीसी बाय-एसए 3. 0) कॉमन्स विकिमीडिया के माध्यम से	2 कॉमन्स विकिमीडिया

3 के माध्यम से पोलिश भाषा विकिपीडिया (सीसी बाय-एसए 3. 0) पर एनज़ो द्वारा "सेंगर-डीएनए-सीक" "पाइरो सिकेंसिंग" माइक्रोबायोलॉजीबाइट्स द्वारा (सीसी बाय-एसए 2. 0) फ़्लिकर के जरिए